微生物知識點（35）(第2/3 頁)

朊病毒，瘋牛病目前無法培養）

2.2.1 動物接種：

1最原始方法

2分離和鑑定病毒

3增殖病毒以製備抗原和疫苗

4病毒實驗研究

常用動物：本動物（馬、牛、羊、豬、雞、鴨、鵝） 小白鼠、豚鼠、家兔、鴿子

接種途徑：

鼻腔內、皮內、皮下、腹腔、靜脈、肌肉、腦內

（接種最多：肌肉、皮下、黏膜）

動物接種優點和缺點

優點：操作簡便

缺點：

1動物體記憶體在特異性抗體

2動物體內帶有病毒（可透過使用無菌動物解決）

2.2.2 雞胚培養：

一般用 9~12 日齡雞胚

1絨毛尿囊膜

2尿囊腔

3羊膜腔

4卵黃囊

5腦內

6靜脈

很多哺乳類病毒不在雞胚上生長（不適應）→牢記！！實驗需掌握

雞胚培養病毒的優點和缺點

優點：經濟、簡便、雞胚易得

缺點：

1有些雞胚帶有母源抗體

2也可能帶有病毒

3很多病毒在雞胚中不生長

2.2.3 細胞培養：

1將離體活組織塊或分流的活細胞加以培養統稱為組織培養，後者又稱單層細胞培養。

2細胞培養適於絕大多數病毒生長，是病毒實驗室的常規技術。

細胞培養的特點：

（1）細胞的生理特性基本一致

（2）對病毒的感染性一致

（3）沒有實驗動物的個體差異

（4）重複性好

（5）與實驗動物相比，透過觀察細胞病變或結合免疫學技術檢測判斷結果。

（6）可透過病毒細胞培養產生的空斑進行克隆純化病毒。

細胞培養的型別

根據細胞的來源、染色體特徵及傳代次數，可分為三種型別:

（1）原代細胞

（2）二倍體細胞株

（3）傳代細胞系

原代細胞：

1動物新鮮離體組織塊（剪成小塊）經胰蛋白酶消化、分散，獲得單個細胞，再生長與培養器皿中。

2有人把培養的第 1 代細胞與傳 10代以內細胞統稱為原代細胞。

3分離病毒最為敏感，尤其是本動物的原代細胞。

二倍體細胞株：

1將長成的單層原代細胞消化分散成單個細胞繼續培養傳代，其染色體數與原代細胞一樣保持其二倍體型的染色體，稱為二倍體細胞。

2如：豬腎細胞系（pK-15）、犬腎細胞系mdcK。

3可傳至一百代左右

4用於病毒分離和疫苗製備

傳代細胞系：

1能在體外持續增殖傳代的細胞系，大多數由癌細胞或二倍體細胞突變而來

2方便易得

3用於病毒的分離鑑定和抗病毒藥物篩選研究。

常用的細胞培養型別

原代細胞:恆河猴腎細胞、人胚腎、肺等細胞，雞胚成纖維細胞

二倍體細胞株:豬腎細胞系（pK-15）、恆河猴胚細胞株（hL-8）、犬腎細胞系

傳代細胞系:hela 細胞、detroit 細胞（胸骨髓細胞系），chang c\/I\/L\/K（人結膜 c、腸 I、肝 L 與腎 K 細胞系），Vero（綠